PCR實(shí)驗(yàn)室的污染來(lái)源

1、樣本間交叉污染：

收集樣本的容器被污染或樣本密封不嚴(yán)外溢；不同樣本移液時(shí)忘記更換槍尖或未使用帶濾芯槍尖；移液器等實(shí)驗(yàn)器具及耗材未及時(shí)消毒滅菌；不同樣本同時(shí)開(kāi)蓋或樣本劇烈震蕩、反復(fù)吹吸導(dǎo)致氣溶膠形成擴(kuò)散，相互交叉污染。

2、實(shí)驗(yàn)試劑污染：

主要是在 PCR 組分試劑加樣過(guò)程中，由于移液器、容器、陰性對(duì)照及其它試劑被核酸模板或陽(yáng)性對(duì)照污染。 加樣過(guò)程中，因?yàn)?PCR 試劑對(duì)溫度十分敏感，需要通過(guò)冰浴使得 PCR 試劑和 PCR 板/管處于 0℃，但這個(gè)過(guò)程也是充滿了污染的風(fēng)險(xiǎn)的。

3、擴(kuò)增產(chǎn)物污染：

大量拷貝的產(chǎn)物泄漏或擴(kuò)增后的PCR反應(yīng)管意外開(kāi)蓋，這是 PCR 反應(yīng)中主要常見(jiàn)的污染問(wèn)題。因?yàn)?PCR 產(chǎn)物拷貝量大，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于 PCR 檢測(cè)數(shù)個(gè)拷貝的極限，所以極微量的 PCR 產(chǎn)物污染，就可形成假陽(yáng)性。

4、克隆質(zhì)粒污染：

作為陽(yáng)性質(zhì)控品的克隆質(zhì)粒外溢。

PCR實(shí)驗(yàn)室的污染應(yīng)急處理方法

1、若核酸樣本溢出：

立即用布或紙巾覆蓋，由外圍向中心傾倒10%的次氯酸消毒劑，約30分鐘后，清除污染物品，再用次氯酸消毒劑擦拭，并用75%酒精噴灑，移動(dòng)紫外車定點(diǎn)照射1小時(shí)。

2、其他不明情況污染：

1、暫停所有實(shí)驗(yàn)操作；2、清理實(shí)驗(yàn)室內(nèi)所有物品，尋找污染來(lái)源；3、加大實(shí)驗(yàn)室的通風(fēng)；4、對(duì)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)所有表面（臺(tái)面、地面及墻面） 進(jìn)行消毒；5、75%酒精空中噴霧；6、開(kāi)啟紫外消毒裝置，延長(zhǎng)紫外照射時(shí)間（4小時(shí)以上）；7、以上措施每日進(jìn)行，直至污染消除；用新試劑及確認(rèn)無(wú)污染的器材進(jìn)行原污染項(xiàng)目的試劑空白檢測(cè)，連續(xù)3次均陰性后方可進(jìn)行常規(guī)檢測(cè)。PCR污染的范圍很廣，不同樓層也會(huì)產(chǎn)生影響，甚至?xí)绊懴噜徑ㄖ?；PCR污染的時(shí)間很長(zhǎng)，幾個(gè)月甚至半年；PCR污染的影響很深，影響我們的生產(chǎn)計(jì)劃，阻礙我們的研發(fā)進(jìn)度，直接造成公司人力、財(cái)力的損失。但隨著新技術(shù)和一些問(wèn)題的明晰，無(wú)污染PCR檢測(cè)的那一天離我們會(huì)越來(lái)越近！